材料與方法

熒光倒置顯微鏡，日本 Nikon 株式會(huì)社 ( 型號(hào): Ti-U) ; 離心機(jī)，德國(guó) Hettich zentrifugen 公司( 型 號(hào): Ｒotina 420) ; CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱，德國(guó)美墨爾特公司 ( 型號(hào): INCO 108) ; 生物安全柜，芬蘭 Kojair Tech Oy 公 司( 型號(hào): BioWizard Sliver SL-130 Class Ⅱ) ; 水浴鍋，德 國(guó)美墨爾特公司( 型號(hào): WNB29L4 L612．0144) ; 水平 搖床，中國(guó)其林貝爾公司( 型號(hào): TS-2) ; 梯度 PCＲ 儀， 日本 Astec 公司( 型號(hào): G02) ; 實(shí)時(shí)熒光定量 PCＲ 儀，美 國(guó) ABI 公司( 型號(hào): 7500 Fast Ｒeal-Time PCＲ System) ; 電泳槽，美國(guó) Bio-Ｒad 公司( 型號(hào): Mini-PＲOTEAN Tetra System) ; 顯影儀，美國(guó) Bio-Ｒad 公司( 型號(hào): Chemidoc) ， 半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜儀，美國(guó) Bio-Ｒad 公司( 型號(hào): Trans-Blot SD Cell) 。將凍存的 HepG2 細(xì)胞放入 37 ℃ 水 中解凍，搖晃使其融化。用一次性移液器吸取多余培 養(yǎng)基至細(xì)胞瓶?jī)?nèi)( 剩余培養(yǎng)基為 5 mL 左右) ，將細(xì)胞瓶 放入顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，隨后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。

結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，各劑量 ox-LDL 誘導(dǎo)模型組 HepG2 細(xì)胞 miＲ-33a 基因表達(dá)量顯著增加( P＜0．01) 。 與模型組比較，辛伐他汀組顯著降低 20、40、160 mg /L ox-LDL 誘 導(dǎo) HepG2 細(xì) 胞 后 miＲ-33a 的 表 達(dá) 水 平 ( P＜0．01) 。與 模 型 組 比 較，冠 心 康 顯 著 下 調(diào) 各 組 HepG2 細(xì)胞 miＲ-33a 表達(dá)水平( P＜0．01) 。組間 方 差 分 析 可 見(jiàn)，用 20 mg /L ox-LDL 誘 導(dǎo) HepG2 細(xì)胞 24 h 后，模型組細(xì)胞出現(xiàn) miＲ-33a 過(guò)表達(dá) ( P＜0．01) 。從 40 mg /L ox-LDL 誘導(dǎo)開(kāi)始，模型組細(xì)胞 miＲ-33a 的表達(dá)受到抑制，但仍高于空白對(duì)照組，隨著 濃度升高，該抑制效果逐漸減輕。microＲNA 是一種長(zhǎng)度約為 18 ～ 24 個(gè)核苷酸且廣 泛參與外周血循環(huán)的微小非編碼單鏈 ＲNA。miＲ-33 被廣泛認(rèn)為是脂質(zhì)調(diào)節(jié)的一個(gè)重要調(diào)控因子，有學(xué)者 發(fā)現(xiàn)抗 miＲ-33 寡核苷酸可以大幅增加 HDL 水平。 其機(jī)制可能是 miＲ-33 在體內(nèi)通過(guò)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái) 調(diào)節(jié)血漿 HDL 水平。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的膽固醇低于基 線水平時(shí)，miＲ-33a 抑制 NPC1 表達(dá)，一方面促進(jìn)內(nèi)源 性膽固醇合成和胞外攝取，另一方面抑制 27-羥基膽甾 醇，減少膽固醇流出。

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